SOP文件肥达氏反应检测的操作规程及

目的：规范肥达（Widal）氏反应检测的操作范围：检验科免疫实验室责任人：免疫实验室专业组长和实验室工作人员检测原理：用已知伤寒沙门菌鞭毛（H）抗原和菌体（O）抗原，甲、乙丙三种副伤寒沙门菌鞭毛抗原的诊断菌液，与被检血清进行细菌凝集反应，如被检血清中有抗体存在，可与相应抗原发生反应，出现肉眼可见的凝集现象为阳性。试剂：包括伤寒H、O，副伤寒甲、乙、丙共五种。每毫升含70亿个菌，使用时以生理盐水稀成每毫升含7亿个菌的悬液备用。标本收集：1、最好使用新鲜血清样本，如需保存，可置2-8℃冷藏48小时或-20℃冷冻4周。2、避免使用溶血、浑浊或脂血样本及反复冻融样本。操作步骤：1、排列小试管5排，每排8支（6支亦可）。2、取试管1支，加生理盐水9.5ml及待检血清0.5ml混合，成为1：20稀释血清。3、每排第一管内加1：20稀释血清1ml。4、从每排第2管开始，至第8管每管加生理盐水0.5ml，自第1管开始，吸取0.5ml，依次对倍稀释至第7管。每排最后1管不加稀释血清，作为菌液对照。5、加诊断菌液，第1排每管加入伤寒杆菌“H”0.5ml；第2排每管加入伤寒杆菌“O”0.5ml；第3、4、5排分别依次加入副伤寒杆菌甲、乙、丙菌液每管0.5ml。于每排第1管分别用记号笔写上“H、O、甲、乙、丙”标记后，将试管架充分振荡，使菌液与稀释血清充分混匀，此时被检血清最终稀释度为1：40、1：80、1：~1：。置37℃水浴箱内16—20小时后，取出观察结果（先勿摇动，观察管底细菌凝集现象。然后，轻摇，观察有无絮状或颗粒状凝集）。结果判定：血清的凝集价是以血清最高稀释度能发生明显凝集现象者，并按此凝集价作出报告。临床上应以二次标本（病程早期及恢复期或中期）的血清凝集价有无明显上升，作为新近感染该病的指征。单份血清凝集价应达到1：以上者，才有诊断上的参考价值。注意事项：1、应在光亮处先观察管底凝集状态，然后轻轻摇动判定结果，不能激烈震荡。2、菌液有摇不散的凝块时，不能使用。3、菌液保存于2—8℃暗处。4、应在标签载明的有效期内使用。参考范围：通常认为“O”凝集价在1：80以上；“H”凝集价在1：以上；甲、乙、丙副伤寒杆菌“O”凝集价在1：80以上才有诊断意义。临床意义：机体感染伤寒、副伤寒杆菌后会产生相应抗体，正常人因隐性感染或预防接种，血清中可含有一定量的抗体。1、H及O效价均增高时可诊断为伤寒，O及A、B、C（其中之一项）效价达1:80以上时，可诊断为副伤寒甲或乙或丙，如效价随病情逐渐上升，诊断价值更大。2、伤寒病人发病第一周后才出现肥达氏反应，第一周内阳性率为50%，第四周可达90%。3、单H凝集价升高而O不高者，可能①曾接受过伤寒菌苗接种；②患过伤寒；③另外少数伤寒患者因O凝集价被Vi抗原影响不增高，仅H凝集价高；④其他沙门氏菌感染。4、曾预防接种过伤寒混合疫苗，再感染伤寒时，H与O凝集价上升较快，但在疾病恢复时，凝集价并不太高，因为预防接种后体内产生的抗体，再感染时病情缓和。5、过去曾接种过伤寒菌苗或患过伤寒近期又感染流感、布氏杆菌时，可产生高滴度的H凝集素及较低的O凝集素，此系回忆反应。6、一般应取双份血清（急性期和恢复期）作对比，如呈四倍以上增长则价值更大，凝集素如明显上升，是新近感染伤寒的指征。

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