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白细胞介素2和白细胞介素18对鸡新城疫
为研究白细胞介素2和白细胞介素18对鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗免疫作用的影响，将84只14日龄无特定病原（SPF）鸡随机分为7组，每组12只；分别设为NDV-IBV二联活疫苗组（对照组）、CHIL-2蛋白+NDV-IBV二联活疫苗免疫增强组、pVAX1-CHIL-2+NDV-IBV二联活疫苗免疫增强组、CHIL-18蛋白+NDV-IBV二联活疫苗免疫增强组、pVAX1-ChIL-18+NDV-IBV二联活疫苗免疫增强组、CHIL-2蛋白+CHIL-18蛋白+NDV-IBV二联活疫苗免疫增强组、pVAX1-CHIL2+pVAX1-ChIL-18+NDV-IBV二联活疫苗免疫增强组。7组鸡均于14日龄进行免疫注射，并于免疫后第0、7、14、21、28、35和42天时对各组鸡进行采血并测定血清中NDV和IBV抗体水平。免疫第48天后每组鸡随机挑取12只进行动物攻毒保护试验。结果表明，CHIL-2和CHIL-18不仅能够显著增强NDV-IBV二联活疫苗所诱导的免疫反应，而且还可以明显提高疫苗的保护率。
关键词：
白细胞介素2;白细胞介素18;疫苗;免疫效果;
白细胞介素2(IL-2）和白细胞介素18(IL-18）是机体重要的细胞因子[1,2]，二者不仅能够提高NK细胞（naturalkillercell,NK）和T细胞（T-lymphocyte）杀伤活性，促进γ-干扰素（IFN-γ）的产生，刺激淋巴细胞转化，而且在介导细胞免疫、抵抗微生物感染、提高疫苗免疫保护水平的潜能方面具有重要作用[3,4,5]。前期作者已成功重组原核表达并纯化了CHIL-2蛋白和ChIL-18蛋白，并构建了鸡pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18真核表达质粒，已证明其在体外细胞中成功表达[6]。本研究在前期研究的基础上进一步展开对重组原核表达产物ChIL-2和ChIL-18蛋白以及真核表达质粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18在鸡体内对疫苗免疫增强作用的研究，为IL-2和IL-18作为家禽疫苗佐剂及免疫增强剂应用于生产实践奠定一定理论基础。
1材料和方法
1.1试验材料
重组鸡白细胞介素2(ChIL-2）蛋白和重组鸡白细胞介素18(ChIL-18）蛋白；真核表达质粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18;14日龄SPF雏鸡购自九江博美莱生物制品有限公司；鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗（NDV-IBV;LaSota+H株）购自九江博美莱生物制品有限公司；NDVF48E9株，湖北省农业科学院畜牧兽医研究所提供。1.2试验设计
14日龄无特定病原（SPF）鸡84只，随机分为7组，每组12只。其中，1组为NDV-IBV二联活疫苗对照组，2组为CHIL-2蛋白免疫增强组，3组为pVAX1-CHIL-2免疫增强组，4组为重组CHIL-18蛋白免疫增强组，5组为pVAX1-ChIL-18免疫增强组，6组为重组CHIL-2蛋白+CHIL-18蛋白免疫增强组，7组为pVAX1-CHIL-2+pVAX1-ChIL-18免疫增强组，见表1。7组鸡均于14日龄按表1所示剂量进行注射，其中疫苗采用滴鼻点眼，其他样品进行腿部肌肉分点注射，并于接种前1d和接种后第0、7、14、21、28、42天时翼下静脉或心脏采非抗凝血分离血清。
1.3血清NDV抗体检测
采用血凝抑制试验（HI）对采集的血清样品进行NDV免疫抗体水平检测。1.4血清IBV抗体检测
用ELISA法测定血清中IBV抗体水平。1.5攻毒感染试验
免疫后第48天，用灭菌生理盐水将新城疫强毒株F48E9稀释至LD50/mL，对各组鸡通过点眼滴鼻途径攻毒，每只0.1mL，然后观察并记录鸡群的精神状态、饮食状况及死亡情况，死亡后剖检并记录病理变化。攻毒后第7天扑杀存活鸡只，剖检并记录病理变化。2试验结果
2.1血清中NDV抗体水平检测结果见图1。
由图1可知，各免疫增强组鸡的NDV抗体水平均高于NDV-IBV疫苗对照组（1组）；各免疫增强组鸡NDV免疫抗体水平在0～7d时快速上升，于21d时达到峰值，第21天后开始缓慢下降。第7～42天，pVAX1-CHIL-2+pVAX1-ChIL-18免疫增强组（7组）和重组CHIL-2蛋白+重组CHIL-18蛋白免疫增强组（6组）的抗体水平仍显著高于其他各免疫组（2、3、4、5组）（P0.05）。2.2血清中IBV抗体水平检测结果
见图2。由图2可知，各免疫增强组鸡的IBV抗体水平均高于NDV-IBV疫苗对照组（1组）；各免疫增强组鸡IBV免疫抗体水平在0～7d时快速上升，于21d时达到峰值，之后缓慢下降。第28～42天，pVAX1-CHIL2+pVAX1-ChIL-18免疫增强组（7组）的抗体水平仍明显高于其他各组（P0.05）。
2.3ChIL-2和ChIL-18对NDV-IBV疫苗抗病毒攻毒结果
结果显示，NDV-IBV疫苗组中12只鸡有3只发病死亡，疫苗保护率为75%;CHIL-2、CHIL-18蛋白组有2只发病，但未死亡，保护率为84%;CHI-2+CHIL-18蛋白组、pVAX1-CHIL2、pVAX1-ChIL-18和pVAX1-CHIL2+pVAX1-ChIL-18质粒组各有1只鸡发病，未死亡，保护率为99.2%。3讨论
本试验发现，各免疫增强组鸡的NDV和IBD抗体水平均高于NDV-IBV疫苗对照组（1组），表明ChIL-2和ChIL-18对NDV-IBV疫苗有明显的免疫增强作用，改善免疫应答，这与其他学者研究结果相似。费聿锋等[7]将原核表达的重组ChIL-2与鸡的四联油苗同时使用，能显著提高新城疫和禽流感的抗体效价，并具有明显的免疫增强作用；王彦彬等[8]研究表明，重组IL-2蛋白具有增强新城疫疫苗免疫效果的作用，提高了血清中抗体水平、T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+亚群水平、CD4+/CD8+的比值，且部分指标差异达到显著水平（P0.05）；姜文博等研究发现，ChIL-18蛋白不仅对新城疫疫苗诱导的HI抗体有增强作用[9]，而且显著增强新城疫疫苗所诱导的细胞免疫和体液免疫反应，明显提高疫苗的保护率[10]。本试验研究发现，用pVAX1-CHIL2和pVAX1-ChIL-18真核表达质粒与疫苗共同免疫，其抗体水平要高于用ChIL-2和ChIL-18原核表达蛋白的。说明真核表达质粒的免疫增强效果更好。Hulse等[11]将重组鸡IL-2真核质粒DNA与IBDV表面蛋白的VP2基因的质粒共同免疫，结果表明IL-2质粒免疫组可以提高抗原提呈细胞数量，在强毒攻击时，能显著提高免疫保护效力。Wang等[12]利用重组的rVP2-IL-2靶向融合蛋白免疫鸡后，结果发现，rVP2-IL-2融合蛋白免疫鸡体的体液和细胞免疫应答水平均明显高于单独的VP2蛋白免疫组，鸡体能产生一个平衡的IgG1和IgG2a抗体反应。攻毒试验表明，rVp2-IL-2融合蛋白免疫组鸡体获得了85%的保护率，表明构建的rVP2-IL-2融合蛋白对IBDV的攻击具有较好的免疫保护作用。
本试验发现，pVAX1-CHIL-2+pVAX1-ChIL-18免疫增强组（7组）和重组CHIL-2蛋白+重组CHIL-18蛋白免疫增强组（6组）的NDV、IBD抗体水平显著高于其他免疫组（2、3、4、5组），表明CHIL-2和ChIL-18协同提高疫苗的免疫增强作用优于单独注射CHIL-2和ChIL-18。这可能是因为IL-2和IL-18都具有激活T细胞、促进B细胞分化及分泌抗体、诱导干扰素产生、增强单核细胞以及NK细胞的杀伤活性的作用[3,13,14,15]；二者不仅对免疫细胞具有较强的免疫刺激作用，而且协同疫苗进行配合免疫，增强免疫效果显著。
张艳雯,玉发杨,黄福标,谭春萍,于冬玲.白细胞介素2和白细胞介素18对鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗免疫作用的影响[J].家禽科学,(02):5-9.
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