病原生物学实验W6厌氧性细菌棒状

厌氧性细菌棒状杆菌分枝杆菌CC1、（续）肠道致病菌粪便标本的分离鉴定——血清学反应（双糖管、玻片凝集试验）2、产气荚膜梭菌致病性实验3、病人痰液（结核分枝杆菌）抗酸染色法4、口腔螺旋体墨汁涂片检查法5、破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、无芽孢厌氧菌（脆弱类杆菌、消化链球菌）、结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌；厌氧培养方法1（续）肠道非致病菌致病菌血清学鉴定左侧两支双糖管接种1号标本的非致病菌，右侧两支双糖管接种2号标本的致病菌（详见上周的推送）。左2支：上层下层均为黄色（发酵乳糖、葡萄糖），穿刺线明显（有鞭毛，见右图）右2支：上层为红色（不发酵乳糖，酚红不变色），下层有黑色沉淀（FeS），偏橙黄色（发酵葡萄糖）1号标本的非致病菌与痢疾抗血清发生凝集（左图）。2号标本的致病菌与肖氏沙门菌（乙型副伤寒沙门菌，右图）抗血清发生凝集。

TIPs：

菌落不要刮取太多，否则在生理盐水中也不能研磨充分，影响凝集现象的观察。

2

产气荚膜梭菌致病性实验

操作步骤：

培养液注入小鼠腹腔→断颈处死→（37℃5-8h）剖腹→涂片→自然干燥→石炭酸复红染色2-3s→迅速水洗→印干→油镜观察3

病人痰液抗酸染色法

操作步骤：取痰液→涂片（略厚）→干燥→固定→石炭酸复红染色10min→水洗→用3%盐酸酒精脱色1-2min→水洗→碱性美兰复染1min→水洗→油镜镜检理论上是像左图这样的~but~这些红色的小菌没有这么清晰，只能微微看得到，完全拍不清楚。右图是唯一用镜头还能分辨的。结核杆菌相关知识点见下方ppt4

口腔螺旋体墨汁涂片检查法

操作步骤：1滴墨汁+牙垢（选磨牙内侧牙龈缝处），研磨均匀→推片→室温干燥→油镜镜检瞪着眼睛找到12点多啊~终于找到一个(≧?≦)ゞ正常情况下与梭形梭杆菌共寄居于人口腔牙龈部，如果免疫力低下，有口腔溃疡、牙龈炎等情况，应该可以看到很多，如下图。螺旋体相关知识复习5

示教

破伤风梭菌破伤风梭菌（革兰染色）G+；周鞭毛（未用鞭毛染色，故此片看不出）；芽孢位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状。破伤风梭菌匍匐生长（划线以外处，呈磨砂样）产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌（格兰染色）G+；荚膜；血琼脂平板：双层溶血环，内环-完全溶血-θ毒素，外环-不完全溶血-α毒素蛋黄琼脂平板：Nagler反应紫牛奶培养基：汹涌发酵产气荚膜梭菌双层溶血环产气荚膜梭菌Nagler反应Nagler反应：测定产气荚膜梭菌卵磷脂酶的试验现象：乳白色浑浊圈原因：卵磷脂酶把蛋黄中的卵磷脂分解为磷酸胆碱和不溶性甘油二酯，在菌落周围形成浑浊圈产气荚膜梭菌汹涌发酵左图为汹涌发酵，右图为紫牛奶的对照，试管上层均为蜡封现象：下层为蜂窝状，上层的蜡封被冲开原因：产气荚膜梭菌分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固；产生大量气体（这只试管还不算特别汹涌）产气荚膜梭菌无芽孢厌氧菌消化链球菌(G+)脆弱类杆菌（G-）结核分枝杆菌结核分枝杆菌-菌膜，表面生长（甘油肉汤培养基）结核分枝杆菌白喉棒状杆菌L/V形排列的白喉棒状杆菌（革兰染色）白喉棒状杆菌（Albert染色），菌体蓝绿色，异染颗粒黑色，有鉴定意义白喉棒状杆菌（吕氏血清平板）白喉棒状杆菌（亚碲酸钾血清平板），黑色菌落Elek平板毒力实验：测白喉毒素（实验书P63）写在后面作为一枚吃货，CC总是忘不了法棍和小胡萝卜餐包的梗o(*￣︶￣*)o

其他都是的胡萝卜餐包，我产气×是法棍o(*≧▽≦)ツ┏━┓

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